1.39 Ein 1800 Basenpaare (bp) langes cDNA-Fragment wurde in die BamHI-Schnittstelle eines Plasmidvektors kloniert ("Single-Site-Ligation"). Da beide Enden identisch sind, kann das Insert in zwei möglichen Orientierungen vorliegen (Sense oder Antisense).
Sie wollen mittels Restriktionsanalyse die Orientierung bestimmen. Folgende Schnittstellen sind bekannt:
- Im Vektor: Es existiert eine einzelne EcoRI-Schnittstelle ca. 50 bp vor (upstream) der Klonierungsstelle.
- Im Insert: Es existiert eine einzelne HindIII-Schnittstelle, die asymmetrisch bei bp 600 des Inserts liegt.
Welcher Restriktionsansatz liefert unterschiedliche Bandenmuster für die beiden Orientierungen und ist daher zur Bestimmung geeignet?
Antwortmöglichkeiten
- (A) Verdau mit BamHI alleine
- (B) Verdau mit HindIII alleine
- (C) Doppelverdau mit EcoRI und HindIII
- (D) Verdau mit EcoRI alleine
- (E) Doppelverdau mit BamHI und EcoRI