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Aufgabe 1-39
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1.39 Ein 1800 Basenpaare (bp) langes cDNA-Fragment wurde in die BamHI-Schnittstelle eines Plasmidvektors kloniert ("Single-Site-Ligation"). Da beide Enden identisch sind, kann das Insert in zwei möglichen Orientierungen vorliegen (Sense oder Antisense).

Sie wollen mittels Restriktionsanalyse die Orientierung bestimmen. Folgende Schnittstellen sind bekannt:

  • Im Vektor: Es existiert eine einzelne EcoRI-Schnittstelle ca. 50 bp vor (upstream) der Klonierungsstelle.
  • Im Insert: Es existiert eine einzelne HindIII-Schnittstelle, die asymmetrisch bei bp 600 des Inserts liegt.

Welcher Restriktionsansatz liefert unterschiedliche Bandenmuster für die beiden Orientierungen und ist daher zur Bestimmung geeignet?

Antwortmöglichkeiten

  • (A) Verdau mit BamHI alleine
  • (B) Verdau mit HindIII alleine
  • (C) Doppelverdau mit EcoRI und HindIII
  • (D) Verdau mit EcoRI alleine
  • (E) Doppelverdau mit BamHI und EcoRI
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